細(xì)胞培養(yǎng)的有效管理對于保持其在研究和治療應(yīng)用中的完整性至關(guān)重要。細(xì)胞系的連續(xù)或長期培養(yǎng)會導(dǎo)致各種并發(fā)癥，例如:

• 微生物污染:

  開放培養(yǎng)容易受到各種微生物感染，這些微生物會改變細(xì)胞行為和生存能力。

• 特征變化:

  關(guān)鍵的細(xì)胞特征，如抗原表達(dá)或抗體產(chǎn)生，可能會隨著時(shí)間的推移而丟失。

• 遺傳變異:

  基因組不穩(wěn)定性可能發(fā)生在以核型不穩(wěn)定而聞名的細(xì)胞系中，從而導(dǎo)致不可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

• 壽命限制:

  某些類型的細(xì)胞在進(jìn)入衰老和停止增殖之前分裂次數(shù)有限。

• 交叉污染風(fēng)險(xiǎn):

  長期培養(yǎng)增加了一個(gè)細(xì)胞系污染另一個(gè)細(xì)胞系的風(fēng)險(xiǎn)，從而導(dǎo)致錯(cuò)誤的數(shù)據(jù)。

• 資源密集度:

  長期培養(yǎng)需要更多的消耗品和勞動力，大大增加了成本。

細(xì)胞庫的戰(zhàn)略方法

細(xì)胞庫系統(tǒng)是減輕上述風(fēng)險(xiǎn)的戰(zhàn)略方法。推薦的系統(tǒng)是主小區(qū)銀行系統(tǒng)，包括以下步驟:

1. 初始隔離:

   新獲得的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)在嚴(yán)格的檢疫條件下隔離和處理，以防止實(shí)驗(yàn)室污染。

2. Token Stock Establishment:

   初始培養(yǎng)擴(kuò)增后，應(yīng)冷凍保存少量安瓿瓶（3-5瓶）作為應(yīng)急備用的象征性儲備。

3. 主細(xì)胞庫形成:

   從代幣儲備安瓿瓶擴(kuò)大培養(yǎng)物，以建立由大量安瓿瓶組成的主細(xì)胞庫（10-20個(gè)或更多，根據(jù)計(jì)劃使用情況而定）。

4. 嚴(yán)格的質(zhì)量控制:

   主細(xì)胞庫的一個(gè)子集經(jīng)歷了全面的質(zhì)量控制測試，其中包括評估細(xì)胞活力，確認(rèn)不存在微生物污染物，并可能進(jìn)行病毒和真實(shí)性測試。

5. 工作細(xì)胞庫的開發(fā):

   然后使用主細(xì)胞庫的一部分創(chuàng)建工作細(xì)胞庫，這是積極研究和應(yīng)用的主要來源。

詳細(xì)的質(zhì)量控制協(xié)議

質(zhì)量控制是維護(hù)細(xì)胞庫的關(guān)鍵部分。它包括:

• 生存力和計(jì)數(shù)測試:

  確保細(xì)胞存活且數(shù)量充足。

• 微生物篩選:

  定期檢測細(xì)菌、真菌和支原體以防止細(xì)胞培養(yǎng)受損。

• 認(rèn)證程序:

  通過DNA分析等方法確認(rèn)細(xì)胞系的身份。

存儲和使用建議

正確的儲存條件如下:

• 專用存儲設(shè)施:

  利用專門為儲存細(xì)胞庫設(shè)計(jì)的設(shè)施，如液氮罐或電冰柜，以防止交叉污染并確保長期生存能力。

一致性和質(zhì)量保證:

• 一致的細(xì)胞材料:

  細(xì)胞庫系統(tǒng)確保實(shí)驗(yàn)中使用的所有材料都來自一致的來源。

• 受控通道數(shù):

  通過使用在可控傳代次數(shù)范圍內(nèi)的細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)可變性被最小化。

• 適時(shí)文化實(shí)踐:

  僅在必要時(shí)培養(yǎng)細(xì)胞有助于保持細(xì)胞系的原始特性，并降低與保持連續(xù)培養(yǎng)相關(guān)的成本。